你问的“分开”具体指哪一种？《海贼王》里路飞和伙伴分开的名场面有好几处，常见理解有这些：

1. 香波地群岛被熊拍飞（伙伴第一次全员分开）
   动画：第405集左右开始（大熊出手在405集，406集起陆续被拍飞）。
   漫画：第513话左右。

   

2. 路飞与草帽团分开两年（3D2Y修行）
   严格说是从上面香波地群岛事件后开始，到第517集左右重新集结（动画517集是两年后重逢的开端）。

   

3. 路飞与山治暂时分开（蛋糕岛篇）
   动画：第776集左右山治被带走，路飞追去蛋糕岛，两人暂时分开。

4. 路飞与索隆等人在和之国分开行动
   动画：第890集左右进入和之国篇后分头行动。

如果你说的是“草帽一伙第一次被迫分开”，那就是动画第405集开始。